Etude du mécanisme d’action des copolymères à blocs amphiphiles pour le transfert de gene in vivo
Par : Chevre, Raphaël
Document archivé le : 09/03/2010
Les copolymères à blocs amphiphiles comptent aujourd’hui parmi les vecteurs les plus efficaces pour le transfert de gène in vivo dans de nombreux tissus tels que le muscle squelettique, le cœur ou les poumons. Le mécanisme d’action de ces vecteurs demeure peu connu, et l’étude de ce mécanisme représente un enjeu majeur pour leur futur développement clinique. Au cours de cette thèse, nous nous sommes plus particulièrement intéressés au Lutrol®, polymère efficace in vivo et déjà admis par les pharmacopées internationales.
L’incapacité de ces molécules à transfecter des cellules en culture suggère que l’environnement cellulaire détermine leur mécanisme d’action. Afin d’étudier le mécanisme de ces vecteurs au niveau cellulaire, nous avons conçu un modèle permettant d’observer le mécanisme du Lutrol® sur les différentes étapes du trajet des acides nucléiques, depuis l’internalisation du transgène jusqu’à son expression. En utilisant plusieurs stratégies in vitro faisant intervenir le Lutrol® en association directe ou indirecte avec les vecteurs cationiques, nous avons déterminé son niveau d’implication dans la transfection, son rôle au niveau de la cellule et des acides nucléiques, mais également les raisons de son inaptitude à transfecter des cellules en culture en identifiant les barrières limitant son utilisation in vitro.
Les résultats obtenus suggèrent fortement que le Lutrol® améliore l’efficacité de transfection par un mécanisme physico-chimique inerte et passif, aboutissant in vivo à une internalisation cellulaire du plasmide par un mécanisme de délivrance directe dans le cytoplasme, indépendant de l’endocytose, et donc en rupture avec celui des lipides cationiques. - 2009NANT18VS
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