Stratégies d'invalidation du gène CFTR dans les cellules épithéliales respiratoires humaines pour la mise au point d'un nouveau modèle de la mucoviscidose
Par : Bellec, Jessica
Document archivé le : 15/09/2015
La mucoviscidose (CF) est une maladie autosomale récessive rare causée par des mutations du gène CFTR (Cystic Fibrosis Transmembrane conductance Regulator). L'atteinte respiratoire caractérisée par une infection chronique et une inflammation délétère reste la cause majeure de mortalité chez les patients. L'étude de modèles cellulaires et animaux CF a permis la compréhension des mécanismes sous-jacents bien que plusieurs questions concernant la composante CFTR-spécifique de l'inflammation et de la réparation du tissu pulmonaire restent en suspens. Afin de proposer de nouveaux modèles cellulaires de la mucoviscidose, deux stratégies d'invalidation du gène CFTR dans des cellules épithéliales respiratoires humaines ont été comparées. L'expression stable de séquences ARN interférentes (shRNA) et du système CRISPR-Cas9 grâce à aux vecteurs lentiviraux dérivés du VIH-1, a permis une diminution de l'expression protéique dans la lignée glandulaire Calu-3. Seule la stratégie CRISPR-Cas9 a permis l'obtention d'un défaut du canal CFTR caractéristique de la mucoviscidose. Les propriétés de migration et de prolifération de cette nouvelle lignée CF ne sont pas altérées, mais une augmentation de la production basale de la cytokine pro-inflammatoire interleukine-8 a été observée. Appliqué aux cellules épithéliales respiratoires primaires, l'outil CRISPR-Cas9 a permis une inhibition du gène CFTR au niveau fonctionnel, démontrant son potentiel d'édition du gène CFTR dans ce type de culture. La caractérisation de ces nouveaux modèles cellulaires de la mucoviscidose et de leurs contrôles isogéniques devrait ainsi apporter un éclairage nouveau sur certains mécanismes encore controversés.
14NANT38-VS
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