Développement de méthodes de production et d'analyse de vecteurs recombinants dérivés de l'adéno-associated virus
Par : Blouin Véronique
Document archivé le : 11/02/2008
De nombreuses études in vivo ont montré que les vecteurs recombinants dérivés de l'adéno-associated virus (AAVr) peuvent transduire efficacement de nombreux organes et conduisent à une expression stable et à long terme du gène. Ces résultats encourageants ont conduit au développement rapide des essais cliniques utilisant les vecteurs AAVr-2. Cependant ces essais chez l'homme nécessitent de grandes quantités de vecteurs AAVr. Les techniques conventionnelles de production et purification montrent alors leurs limites. Nous avons donc développé des méthodes de productions alternatives plus simples et reproductibles, en établissant des lignées stables, d'encapsidation, contenant intégré dans leur génome les gènes rep-cap hybrides pour les sérotypes-1 et -5. Nous avons aussi décrit une procédure de purification par chromatographie liquide basée sur des résines échangeuses d'ions. Cette procédure a l'avantage d'être directement applicable à grande échelle, et pourrait s'adapter à différents sérotypes. Cette méthode permet de purifier le sérotype-5, le plus divergent au niveau de la séquence protéique de la capside comparée à 1'AAVr-2. Les stocks d'AAVr obtenus présentent une pureté supérieure aux méthodes traditionnelles et transduisent aussi efficacement les organes cibles. Afin de mieux caractériser et différentier les capsides AAVr des différents sérotypes de plus en plus nombreux, nous avons montré que la digestion protéolytique des virions AAVr-2, donne un profil de digestion unique. Cette analyse protéolytique des capsides AAVr permet de distinguer les AAVr-2 des AAV-1 et -5.
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